En partant des besoins de nos clients pour des réactions ciblées et prenant en considération les conditions opératoires, nous criblons et identifions les enzymes appropriées à la fois à partir de la littérature et du datamining des séquences dans les bases de données publiques, ainsi que dans notre collection exclusive de plus de 1000 génomes séquencés à partir de notre collection de micro-organismes propriétaires.

Screening des enzymes « sauvages »

Une fois que les gènes les plus prometteurs ont été sélectionnés et que le test de criblage à haut débit est mis au point, nous clonons et exprimons les gènes. L’expression peut être réalisée dans différents systèmes d’expression tels que Escherichia coli et Yarrowia lipolytica (autres sur demande). Nous testons ensuite l’activité des enzymes produites.

Exemples de projets réalisés:

Evolution dirigée utilisant des technologies propriétaires

Notre plateforme  d’évolution dirigée moléculaire implique à la fois une technique de recombinaison aléatoire de gènes (L-Shuffling™) et des approches basées sur des algorithmes (Evosight™). Elle permet d’obtenir de nouvelles enzymes propriétaires aux performances considérablement améliorées, telles que l’activité spécifique et la stabilité pour utilisation dans  des conditions industrielles exigeantes.

Les technologies brevetées de Protéus permettent d’améliorer radicalement l’activité enzymatique et donc d’offrir des solutions compétitives pour les applications de ses clients. Des méthodes semi-rationnelles (stratégie de mutagenèse rationnelle) peuvent également être utilisées pour générer une amélioration supplémentaire, si une structure 3D de l’enzyme est décrite.

Criblage HTS

  • HPLC UPLC, Détecteur UV RI , MS et ELSD
  • GC – FID, GC – MS
  • Micro GC avec headspace
  • Chromatographie ionique
  • Développement de substrats chromogènes ou fluorescents (Clips-OTM technologie propriétaire )

CLIPS-O™ repose sur des réactions chimiques adaptées à la découverte de nouvelles activités enzymatiques pour des criblage à haut débit. CLIPS-O™ est une technologie propriétaire polyvalente qui permet de concevoir des substrats colorimétriques ou fluorimétriques.

Schéma-criblage-hts

Exemple de réalisations:

Gonzalez-GarcÌa E., Grognux J., Wahler D., Reymond J.; Synthesis and Evaluation of Chromogenic and Fluorogenic Analogs of Glycerol for Enzyme Assays; Helvetica chemica acta; 86:2458-2470. 2003

Développement des conditions d’expression

Disposer d’un système d’expression efficace est la clé pour élaborer un procédé biocatalytique rentable. C’est pourquoi nous pouvons tester une variété de systèmes d’expression (dont E. coli, Bacillus, Pseudomonas, Yarrowia lipolytica) et, pour chacun d’eux, un panel de vecteurs et de conditions permettant :

  • l’expression intracellulaire, périplasmique ou sécrétée
  • expression inductible ou constitutive
  • Vecteurs épisomiques ou intégratifs

Les technologies d’évolution dirigée sont également un moyen d’améliorer l’expression et/ou la solubilité des enzymes. Des protocoles de criblage à haut débit avec comme objectif d’améliorer l’expression et/ou la solubilité des enzymes sont mis en œuvre selon la cible.

schéma-condition-dexpression

Formulation d’enzymes

La formulation améliore la stabilité des enzymes tant à l’utilisation qu’au stockage. L’immobilisation permet le recyclage des enzymes aussi bien le dans cas des procédés discontinus que pour les procédés continus (y compris pour la Flow Chemistry).

Protéus sélectionne à la demande de ses clients le meilleur support pour l’immobilisation de l’enzyme cible, en fonction du procédé et des contraintes réglementaires. Les méthodes de plan d’expériences (DoE) sont mise en œuvre pour optimiser les conditions d’immobilisation des enzymes.

enzyme-formulation